Ryhmä persialaisten lähettejä saapuu Spartaan pyytämään Spartan alistumista kuningas Kserkseen (Rodrigo Santoro) tahtoon. Spartan kuningas Leonidas (Gerard Butler) hylkää tarjouksen, potkaisee viestintuojat syvään kuiluun, koska loukkasivat kuninkaan puolison Gorgon (Lena Headey) kunniaa ja päättää ryhtyä sotaan persialaisia vastaan. Leonidas lähtee kysymään neuvoja ja esittelemään sotasuunnitelmansa vuorella asuville oraakkeleille, jotka kuitenkin neuvovat Leonidasta olemaan ryhtymättä sotaan, koska he eivät suosi armeijan poistumista kaupungista uskonnollisen karneia-festivaalin aikana.
Oraakkeleiden ja neuvoston vastustuksesta huolimatta Leonidas päättää kerätä 300 parasta sotilastaan, jotka kaikki ovat jo saaneet pojan jatkamaan sukuaan, ja lähteä vastustamaan persialaisten aikomuksia vallata alue. Matkalla spartalaisten joukkoon liittyy arkadialaisia ja muita sotilaita toisista Kreikan kaupunkivaltioista. Ryhmä onnistuu pitämään puolensa kärsimällä vähäisiä tappioita. Sitkeä vastarinta tekee vaikutuksen Kserkseeseen, joka tapaa henkilökohtaisesti Leonidaksen pyytääkseen hänen johtamiaan joukkoja antautumaan. Palkkioksi hän lupaa Leonidakselle paljon valtaa ja rahaa. Leonidas hylkää tarjouksen ja uhoaa saavansa Kserkseen vielä vuotamaan verta.
300 perustuu Frank Millerin samannimiseen sarjakuvaan, joka keskittyy löyhästi Thermopylain taisteluun vuonna 480 eaa. Tosin elokuvan on sanottu loukkaavan iranilaisia ja provosoivan yhdysvaltalaisia yhä enemmän maata vastaan, sillä se kuvaa persialaiset ilkeiksi ja kreikkalaiset jaloiksi suurella kontrastilla.
Itse elokuva on kuvattu suurimmaksi osaksi bluescreenia hyväksi käyttäen, jotta alkuperäisen sarjakuvan kuvitus saataisiin esiin, mikä tekee elokuvasta kertakaikkisen viihdyttävän. Myös kaikki kohtaukset on toteutettu kekseliäästi, joiden aikana on kiva katsella kun vihollisia putoaa ja hidastuksetkin hoitavat osuutensa rehellisesti.
Hahmot sopeutuvat tarinaan kuin nakutettu. Butler tekee Spartan kuninkaana uransa parhaan roolin, joka ei tunne yhtään pelkoa. Ainoan naisroolin hoitava Headey tekee Gorgona loistavaa jälkeä. Sivuroolissa Dominic West hoitanee tonttinsa kiitettävästi, kuten myös tarinan kertojana toimiva ja Diliosta esittävä David Wenham. Santoro suoriutuu hienovaraisesti Kserkseen roolissa, joka on erittäin pitkä ja julman näköinen.
Elokuva voitti vuoden 2008 Saturn-gaalassa kymmenestä ehdokkuudesta kaksi palkintoa (paras toiminta/seikkailu/trillerielokuva ja ohjaus), ollen ehdolla kahdeksassa muussa sarjassa (mm. paras miespääosa, miessivuosa (Wenham), naissivuosa (Headey) ja käsikirjoitus). Se rikkoi myös ennätyksiä tuottamalla 70 miljoonaa dollaria avausviikonloppunaan, oli tuottoisin ensi-ilta Yhdysvalloissa ja rikkoi edellisen enntäyksen, jonka Ice Age: Jäätikkö sulaa asetti, sekä oli kolmanneksi tuottoisin alle 17-vuotiailta kielletyn elokuvan ensi-ilta elokuvien The Matrix Reloaded ja The Passion on the Christ jälkeen.
Loppujen lopuksi 300 tarjoaa huikeimmat ja historialliset taistelukohtaukset mitä valkokankaalla on nähty.
